PCR實(shí)驗室又叫基因擴增實(shí)驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。通過(guò)DNA基因追蹤系統，能迅速掌握患者體內的病毒含量，其精確度高達納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類(lèi)抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。

　　開(kāi)展PCR實(shí)驗室應具備的條件

　　1、必須擁有標準的的PCR熒光實(shí)驗室;

　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出　　由于該技術(shù)不僅實(shí)現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它有特異性更強、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應用。

　　2、檢測設備必須符合標準PCR熒光實(shí)驗室設置要求;

　　熒光定量PCR儀+實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件，構成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測系統。

　　3、必須通過(guò)國家臨床檢驗中心的驗收和認證;

　　4、檢測人員必須通過(guò)國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓并取得合格證書(shū);

　　PCR實(shí)驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班，并持證上崗。PCR實(shí)驗室通過(guò)驗收，實(shí)驗室至少必須應有兩個(gè)以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實(shí)驗室必須建立嚴格的實(shí)驗室管理制度、建立標準化操作程序(SOP)、建立系列質(zhì)量管理文件等，確保實(shí)驗室日常運行符合國家衛生部的要求，確保檢測結果準確、確保實(shí)驗室衛生安全，確保實(shí)驗室長(cháng)期穩定運行

　　5、必須在無(wú)菌無(wú)塵環(huán)境下進(jìn)行操作

　　下面介紹如何建立PCR實(shí)驗室

　　1、建立樣品準備區

　　這個(gè)區域專(zhuān)門(mén)用作樣品的準備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應該采取預防措施：

　?、臥CR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。

　?、平M織培養物、組織標本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。

　?、怯糜跇悠诽幚淼墓ぞ卟荒鼙挥米髌胀ǚ肿涌寺〉墓ぞ?，也不能用作操作靶序列。

　?、菵NA樣品應該用有專(zhuān)門(mén)的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。

　?、纱篌w積樣品應該用單獨包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。

　?、使茏哟蜷_(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開(kāi)，這樣會(huì )產(chǎn)生氣溶膠。

　?、巳魏螘r(shí)候都應該穿實(shí)驗服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗服要專(zhuān)門(mén)用于樣品準備間，經(jīng)常清洗。

　　2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會(huì )。為了避免這一問(wèn)題，反轉錄一步可以在樣品準備區進(jìn)行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。

　　3、建立前PCR區。

　　該去專(zhuān)門(mén)用于準備各種反應，這個(gè)區域必須保持干凈，而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備，特別是專(zhuān)門(mén)用于前PCR區的正壓活塞式移液管。

　　4、PCR實(shí)驗室試劑的操作。

　?、潘玫乃腥芤憾紤摏](méi)有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

　?、扑蠵CR試劑中使用的水都應該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。

　?、窃?0℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。

　?、人迷噭┒紤撘源篌w積配制，實(shí)驗一下看試劑是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。

　?、伤性噭┖蜆悠窚蕚溥^(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

　?、市屡渲频脑噭┰谟糜跍蕚湫碌臉吮局皯摷右詸z驗。

　?、藰悠窚蕚浜颓癙CR區所使用的移液管在不使用時(shí)都應該小心保存。

　　5、在前PCR區建立PCR混合物。

　?、趴梢园鸭纯炭捎玫摹爸骰旌衔铩比芤号浜?、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。

　?、迫绻愕膶?shí)驗室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經(jīng)濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。

　?、亲鳛橐粋€(gè)規則，應該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強陽(yáng)性對照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。

　?、汝幮詷悠芬c每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。

　?、僧斪鲫?yáng)性對照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應該使用最少數量的核酸。

　?、视捎诒仨氂袑φ辗磻?，對照模板的特點(diǎn)應該予以考慮。

　　6、控制污染的方法。

　　已設計出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線(xiàn)，這種方法不能完全消除污染問(wèn)題，但可以將污染降低幾個(gè)數量級。

　　7、后PCR區PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數據，應該留出一個(gè)專(zhuān)門(mén)用于反應后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專(zhuān)門(mén)用于這一目的，決不能把實(shí)驗室這一區域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。